RV的囊膜糖蛋白(glycoprotein，G)是其逆行跨突触所必需的蛋白，其受体大量分布在轴突末端，感染后可沿轴突逆行进入神经元胞体开启病毒复制，G蛋白缺失的RV(RV-∆G)会丧失跨突触能力，而其复制及转录不受影响(可持续高丰度表达外源基因)，可逆向高亮度标记神经元精细形态。补偿RV-G蛋白，可辅助RV-∆G逆行跨突触感染上一级神经元，从而实现跨单突触神经网络标记。

利用重组的禽类肉瘤病毒(A-viansarcoma-leukosisvirus,ASLV)的外膜蛋白(EnvA)融合蛋白包装RV形成的病毒粒子，可特异性识别EnvA的受体TVA介导病毒特异性地感染细胞。利用Cre转基因鼠结合Cre-LoxP控制表达TVA及G蛋白的AAV辅助病毒，可实现只在特定区域特异类型神经元中表达TVA及G蛋白，从而利用RV-En-vA-∆G实现对特异类型神经元的逆向跨单级突触标记。

图1.跨单级RV改造原理及RV逆行跨单级突触标记示意图。

RV-EnvA-A G-dsRed结合表达G蛋白的辅助病毒实现神经元跨单突触标记。在两侧海马、丘脑背外侧核(LD)、丘脑前背侧核(AD)、丘脑室旁核(PVA)等脑区都能看到红色荧光蛋白标记的神经元。

跨单突触逆行标记类神经干细胞产品

突触标记

用基因工程手段将突触结构上特异性的标志物融合荧光蛋白，通过荧光观察突触结构。

荧光示踪标记