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阿尔茨海默病(AD)造模病毒

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease, AD)是最常见的神经退行性疾病,也是痴呆的主要形式。临床上,AD表现为认知能力下降,最初表现为轻度认知性痴呆,最终发展为严重的智力缺陷和无法应付日常生活。

神经病理学上,AD大脑表现出淀粉样蛋白‐β(Amyloid β, Aβ)的沉积,作为细胞外斑块和神经元内神经纤维缠结(Neurofibrillary tangles, NFT),由过度磷酸化的微管相关Tau蛋白组成。

造模方法

1.AD转基因模型

转基因模型是对现有的基因构成进行基因修饰或改变目标基因在正常染色体上的位置。为了解AD发病机制,已经开发了各种加速积累Aβ和Tau缠结的转基因小鼠模型,如APP23、TgCRND8、TgCRND8、APPPS1等多种不同品系。


● 实例

利用原核显微注射技术,将分别编码人APPSwe和tauP301L (4R/0N)的两个独立转基因构建体共注射到来源于PS1M146V敲入纯合子小鼠的单细胞胚胎中。注射有APP和tau基因的胚胎转移至受体鼠体内,由此得到的新生小鼠后代进行基因分型以鉴定3×Tg-AD小鼠。免疫印迹结果显示转基因小鼠大脑中APP和Tau蛋白表达水平升高。

图1 三转基因(3×Tg-AD)小鼠模型的构建及鉴定

【参考文献】

Oddo S, Caccamo A, Shepherd JD, et al. Triple-transgenic model of Alzheimer's disease with plaques and tangles: intracellular Abeta and synaptic dysfunction. Neuron. 2003 Jul 31;39(3):409-21.


2. AAV诱导的AD模型(我司开发)

通过不同的给药途径,将AAV介导基因进行表达从而构建AD模型。


● 实例一

通过脑立体定位注射腺相关病毒载体来在小鼠海马区表达蛋白tau或淀粉样前体蛋白制作AAV-AD模型。12周后对小鼠大脑进行分析,APP.SLA在CA和皮质的锥体神经元中有明显的表达,抗体6E10显示APP代谢物在神经细胞内大量积聚。免疫印迹结果显示海马区蛋白提取物APP.SLA或Tau.P301L的相对水平分别比内源性小鼠APP或Tau.P301L高约两倍。脑内注射AAV-APP.SLA 6个月后出现淀粉样斑块,在淀粉样斑块周围的营养不良的轴突中也有磷酸化的tau。